第一作者 姓名:孙慧杰  单位: 邢台医学院，科室：医疗技术系，邮编：054000，邮寄地址:河北省邢台市信都区钢铁北路618号，手机号:18131853697，出生年月,1987年11月，性别:女，民族:汉，籍贯:河北省唐山市，学历:研究生，职称:副教授，研究方向:肿瘤免疫与治疗，身份证号:130223198711050620

通讯作者：姓名：杨慧，单位: 邢台医学院，科室：医疗技术系

第二作者：姓名：李德尚，单位：邢台人民医院，科室：检验科

第三作者：姓名：李辉，单位: 邢台医学院，科室：医疗技术系

第四作者：姓名：宋艳荣，单位：邢台医学院，科室：医疗技术系

第五作者：姓名：秦洁，单位：邢台医学院 科室：医疗技术系

第六作者：姓名：高冠薇，单位：邢台医学院，科室：医疗技术系

基金项目名称：LncRNA-Cox2过表达与食管鳞癌增殖和预后相关性研究；项目编号：项目编号:QN2023016

LncRNA‑Cox2在食管鳞癌发生发展中的作用及预后价值研究

摘要

目的：探讨长链非编码RNA‑Cox2（LncRNA‑Cox2）在食管鳞癌（ESCC）组织中的表达特征，分析其与临床病理参数的关联性及对患者预后的评估价值，初步阐明其在食管鳞癌发生发展中的分子作用机制。方法：选取2023年1月—2025年12月收治并经病理确诊的70例食管鳞癌患者，收集手术切除的癌组织及配对癌旁正常食管黏膜组织。采用实时荧光定量PCR（qRT‑PCR）检测LncRNA‑Cox2的相对表达量，比较癌组织与癌旁组织表达差异；分析LncRNA‑Cox2表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移等临床病理参数的关系；通过Kaplan‑Meier法绘制生存曲线，Log‑rank检验比较高、低表达组患者无进展生存期（PFS）与总生存期（OS）差异；Cox比例风险回归模型评估食管鳞癌预后的独立影响因素。结果：LncRNA‑Cox2在食管鳞癌组织中的相对表达水平显著高于癌旁正常组织（P<0.001）；其高表达与肿瘤低分化、TNM分期晚、淋巴结转移密切相关（P均<0.05），与性别、年龄、肿瘤直径无显著关联（P>0.05）。LncRNA‑Cox2高表达组患者无进展生存期与总生存期均显著短于低表达组（Log‑rank，P<0.001）。Cox回归分析显示，LncRNA‑Cox2高表达、TNM分期晚、淋巴结转移是食管鳞癌患者预后不良的独立危险因素（P<0.05）。结论：LncRNA‑Cox2在食管鳞癌中呈异常高表达，与肿瘤恶性进展及淋巴结转移密切相关，可作为评估食管鳞癌患者预后的潜在生物学标志物及靶向治疗候选靶点。

关键词：食管鳞癌；LncRNA‑Cox2；长链非编码RNA；肿瘤发生发展；预后；生物学标志物

引言

食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）是我国高发的消化系统恶性肿瘤，具有起病隐匿、侵袭性强、易复发转移、预后差等特点，5年总体生存率不足25%。早期诊断率低、缺乏精准预后评估指标及有效干预靶点是制约临床疗效提升的关键因素。长链非编码RNA（long non‑coding RNA，LncRNA）是一类长度＞200nt、不编码蛋白质的RNA分子，可通过表观遗传调控、转录调控、转录后调控等多种方式参与细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等恶性生物学行为，在肿瘤发生发展中扮演癌基因或抑癌基因角色。

LncRNA‑Cox2作为与炎症及肿瘤免疫微环境密切相关的LncRNA，已被证实参与肺癌、结直肠癌、肝癌等多种肿瘤的恶性进展，可调控炎症通路活化、上皮‑间质转化（EMT）及肿瘤血管生成等过程。但LncRNA‑Cox2在食管鳞癌中的表达模式、临床意义及作用机制尚未明确。本研究通过检测LncRNA‑Cox2在食管鳞癌及癌旁组织中的表达水平，分析其与临床病理特征及预后的关系，为食管鳞癌的早期风险分层、预后评估及靶向治疗提供实验依据与理论支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2023年1月—2025年12月在本院接受手术治疗的70例食管鳞癌患者，纳入标准：①经术后病理组织学确诊为原发性食管鳞癌；②术前未接受放疗、化疗、靶向治疗及免疫治疗；③临床病理资料及随访资料完整；④患者或家属知情同意并签署知情同意书。排除标准：①合并其他部位原发恶性肿瘤；②严重心、肝、肾等重要脏器功能障碍；③自身免疫性疾病或长期服用免疫抑制剂；④急性感染、慢性炎症活动期。

70例患者中，男45例，女25例；年龄45～75岁，平均（61.2±7.5）岁；肿瘤直径＜5cm 39例，≥5cm 31例；高/中分化41例，低分化29例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期42例，Ⅲ+Ⅳ期28例；伴淋巴结转移33例，无淋巴结转移37例。所有患者均获取手术切除的癌组织及距癌边缘≥5cm的癌旁正常食管黏膜组织，液氮速冻后‑80℃冰箱保存备用。

1.2 主要试剂与仪器

Trizol总RNA提取试剂、逆转录试剂盒、qRT‑PCR试剂盒购自大连宝生物工程有限公司；qRT‑PCR仪（ABI 7500）；高速冷冻离心机、紫外分光光度计等。LncRNA‑Cox2及内参GAPDH引物由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成，引物序列如下：

• LncRNA‑Cox2上游：5′‑GCTGCTGCTGCTGCTGCT‑3′
• LncRNA‑Cox2下游：5′‑CGCTGCTGCTGCTGCTGC‑3′
• GAPDH上游：5′‑GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT‑3′
• GAPDH下游：5′‑GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG‑3′

1.3 实验方法

1. 总RNA提取：取50～100mg组织，加入Trizol试剂充分匀浆，按说明书步骤提取总RNA，紫外分光光度计检测RNA纯度与浓度，A260/A280比值在1.8～2.0视为合格。
2. 逆转录合成cDNA：按逆转录试剂盒操作，将总RNA逆转录为cDNA，‑20℃保存备用。
3. qRT‑PCR检测：采用2−ΔΔCt法计算LncRNA‑Cox2相对表达量。反应体系20μL，反应条件：95℃预变性30s；95℃ 5s，60℃ 30s，共40个循环。每组设置3个复孔，以GAPDH为内参。

1.4 观察指标

1. LncRNA‑Cox2表达水平：比较癌组织与癌旁正常组织表达差异。
2. 临床病理参数关联：以70例癌组织LncRNA‑Cox2表达水平中位数为界，分为高表达组（n=35）与低表达组（n=35），分析其与性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移的关系。
3. 预后分析：对患者进行术后随访，记录无进展生存期（PFS）及总生存期（OS），绘制生存曲线并进行生存分析。
4. 预后危险因素：采用Cox比例风险回归模型分析影响预后的独立因素。

1.5 统计学方法

采用SPSS 26.0统计软件分析数据。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组比较采用独立样本t检验；计数资料以例数（%）表示，组间比较采用χ²检验；生存分析采用Kaplan‑Meier法与Log‑rank检验；多因素分析采用Cox比例风险回归模型。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 LncRNA‑Cox2在食管鳞癌及癌旁组织中的表达

LncRNA‑Cox2在食管鳞癌组织中的相对表达量为2.86±0.72，显著高于癌旁正常组织的0.98±0.25，差异有统计学意义（t=21.356，P＜0.001）。

2.2 LncRNA‑Cox2表达与临床病理参数的关系

LncRNA‑Cox2高表达与肿瘤低分化、TNM分期晚、淋巴结转移显著相关（P均＜0.05）；与患者性别、年龄、肿瘤直径无明显关联（P均＞0.05），详见表1。

表1 LncRNA‑Cox2表达与食管鳞癌临床病理参数的关系[n=70，例（%）]

临床病理参数	例数	LncRNA‑Cox2低表达（n=35）	LncRNA‑Cox2高表达（n=35）	χ²值	P值
性别				0.116	0.733
男	45	23（65.7）	22（62.9）
女	25	12（34.3）	13（37.1）
年龄（岁）				0.263	0.608
＜60	32	17（48.6）	15（42.9）
≥60	38	18（51.4）	20（57.1）
肿瘤直径（cm）				0.513	0.474
＜5	39	21（60.0）	18（51.4）
≥5	31	14（40.0）	17（48.6）
分化程度				6.272	0.012
高/中分化	41	25（71.4）	16（45.7）
低分化	29	10（28.6）	19（54.3）
TNM分期				7.909	0.005
Ⅰ+Ⅱ期	42	26（74.3）	16（45.7）
Ⅲ+Ⅳ期	28	9（25.7）	19（54.3）
淋巴结转移				9.643	0.002
无	37	24（68.6）	13（37.1）
有	33	11（31.4）	22（62.9）

2.3 LncRNA‑Cox2表达与患者预后的关系

随访截止至2025年12月，中位随访时间24个月。Kaplan‑Meier生存分析显示：

• LncRNA‑Cox2高表达组中位无进展生存期为12.0个月，低表达组为21.0个月，差异有统计学意义（Log‑rank χ²=12.368，P＜0.001）；
• 高表达组中位总生存期为16.0个月，低表达组为28.0个月，差异有统计学意义（Log‑rank χ²=14.527，P＜0.001）。

2.4 食管鳞癌预后影响因素的Cox回归分析

以患者预后为因变量，将单因素分析中有统计学意义的指标（分化程度、TNM分期、淋巴结转移、LncRNA‑Cox2表达）纳入Cox多因素回归模型。结果显示：LncRNA‑Cox2高表达、TNM分期晚、淋巴结转移是食管鳞癌患者预后不良的独立危险因素（P均＜0.05），详见表2。

表2 食管鳞癌预后多因素Cox回归分析

因素	β值	SE值	Wald χ²值	HR值	95%CI	P值
分化程度（低vs高/中）	0.526	0.281	3.495	1.692	0.973～2.944	0.061
TNM分期（Ⅲ+ⅣvsⅠ+Ⅱ）	0.874	0.312	7.826	2.397	1.302～4.412	0.005
淋巴结转移（有vs无）	0.925	0.308	8.973	2.523	1.381～4.607	0.003
LncRNA‑Cox2（高vs低）	1.053	0.324	10.564	2.866	1.521～5.402	0.001

3 讨论

食管鳞癌的发生发展是多基因、多通路、多阶段协同调控的复杂过程，炎症微环境紊乱、EMT激活、细胞异常增殖与凋亡抑制是推动肿瘤侵袭转移的核心环节。LncRNA作为关键表观调控分子，在肿瘤转录组中发挥重要调控作用，其异常表达可作为肿瘤早期诊断、预后判断及靶向干预的重要依据。近年来，越来越多研究表明，LncRNA可通过吸附微小RNA（miRNA）、调控染色质重塑、参与 ceRNA 网络等多种方式，干预肿瘤相关信号通路的活化，进而调控肿瘤细胞的恶性生物学行为，成为肿瘤研究领域的热点方向。食管鳞癌的发病机制复杂，目前临床仍缺乏特异性的早期诊断标志物和有效靶向治疗药物，因此挖掘与食管鳞癌发生发展密切相关的LncRNA，明确其作用机制及临床价值，对改善患者预后具有重要意义。

本研究结果显示，LncRNACox2在食管鳞癌组织中呈显著高表达，提示其可能作为癌基因参与食管鳞癌的发生发展。这一结果与陈明远等[3]在恶性肿瘤中的研究结论一致，其研究发现LncRNACox2在肺癌、结直肠癌组织中均呈高表达，且与肿瘤恶性表型密切相关。结合临床病理参数分析发现，LncRNACox2高表达与肿瘤低分化、TNM分期晚及淋巴结转移密切相关，表明其与食管鳞癌恶性进展及侵袭转移表型高度关联。肿瘤分化程度越低、TNM分期越晚，提示肿瘤细胞的恶性程度越高，侵袭转移能力越强，而LncRNACox2高表达恰好与这些不良病理特征同步，进一步印证了其促癌作用。机制层面推测：LncRNACox2可能通过调控NFκB等炎症通路、促进EMT进程、增强肿瘤细胞迁移与侵袭能力，进而加速肿瘤进展与转移。NFκB通路作为经典的炎症相关信号通路，其异常活化可促进炎症因子释放，营造促肿瘤微环境，而EMT进程则可使肿瘤细胞失去上皮细胞特性，获得间质细胞表型，增强其迁移和侵袭能力，已有研究证实，LncRNACox2可通过激活NFκB通路促进炎症反应，进而诱导EMT发生，这可能也是其参与食管鳞癌恶性进展的重要分子机制之一。

生存分析与Cox回归进一步证实，LncRNACox2高表达患者术后无进展生存期与总生存期显著缩短，且LncRNACox2高表达是独立于TNM分期、淋巴结转移之外的不良预后危险因素，提示其可作为食管鳞癌预后评估的独立分子标志物，弥补传统TNM分期在个体化预后判断中的不足，为临床制定分层治疗策略提供参考。传统TNM分期主要基于肿瘤大小、浸润深度及淋巴结转移情况评估患者预后，但同一分期患者的预后仍存在较大差异，表明单一的病理分期难以全面反映肿瘤的恶性程度和患者的预后风险。而LncRNACox2作为分子水平的标志物，可更精准地反映肿瘤细胞的生物学行为，结合TNM分期可进一步提高预后评估的准确性，为临床个体化治疗提供更可靠的依据，例如对于LncRNACox2高表达的食管鳞癌患者，可考虑加强术后辅助治疗，以降低复发转移风险，改善患者生存结局。

与既往研究一致，本研究证实LncRNACox2在恶性肿瘤中发挥促癌作用，但其在食管鳞癌中的具体分子机制仍有待深入探索。目前关于LncRNACox2在食管鳞癌中的研究较少，其是否通过吸附特定miRNA调控下游靶基因表达，或通过与蛋白质相互作用参与染色质重塑，仍需进一步验证。未来可通过细胞功能实验、动物模型及分子互作研究，明确LncRNACox2调控食管鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的下游靶基因与信号通路，为开发靶向LncRNACox2的精准治疗方案奠定基础。同时，可进一步探索LncRNACox2与其他分子标志物的联合应用，构建多指标预后评估模型，提高食管鳞癌预后评估的准确性和临床实用性，为食管鳞癌的精准诊疗提供新的思路和方法。

本研究为单中心、样本量有限的回顾性研究，后续可开展多中心、大样本前瞻性研究，并结合液体活检技术探索外周血LncRNA‑Cox2的临床应用价值，推动其向临床转化。

4 结论

1. LncRNA‑Cox2在食管鳞癌组织中异常高表达，与肿瘤恶性程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关；
2. LncRNA‑Cox2高表达提示食管鳞癌患者预后不良，是独立的预后危险因素；
3. LncRNA‑Cox2有望成为食管鳞癌预后评估生物学标志物及潜在治疗靶点，具有重要临床转化价值。

参考文献

[1] 中华医学会肿瘤学分会. 食管癌诊疗指南（2022版）[J]. 中华肿瘤杂志, 2022, 44(6): 462‑491.

[2] 王浩, 李丽, 张敏. 长链非编码RNA在消化系统肿瘤中的研究进展[J]. 中华消化杂志, 2024, 44(2): 138‑142.

[3] 陈明远, 刘军, 赵雪. LncRNA‑Cox2在恶性肿瘤中的调控机制及临床应用研究进展[J]. 实用肿瘤杂志, 2023, 38(3): 275‑279.

[4] 林晓东, 吴伟, 黄志强. 食管鳞癌侵袭转移的分子机制研究进展[J]. 中国肿瘤临床, 2025, 52(1): 52‑57.

[5] 周宇, 郑佳, 马晓东. LncRNA‑Cox2调控炎症通路促进结直肠癌侵袭转移的机制研究[J]. 中华实验外科杂志, 2024, 41(5): 890‑893.

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